期刊简介
《中华整形外科杂志》创刊于1985年，双月刊，为中华医学会主办、中国协和医科大学整形外科研究所出版的整形外科专业学术期刊，国内外公开发行。本刊以整形外科、烧伤外科、显微外科、骨科、口腔科、耳鼻喉科、眼科、泌尿外科、皮肤科等学科临床医师及科研工作者为读者对象，刊登对整形外科发展具有导向性、指导性的评论和文件，报道整形外科领域先进的科研成果和诊疗经验，以及对整形外科临床有指导作用、与整形外科临床密切结合的基础理论研究。主要栏目有：论著、工作研究、经验交流、病例报告、技术改进、综述、讲座、警钟等。本刊被多家国内外生物医学期刊数据库和医学文摘所收录。
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首页>中华整形外科杂志
- 杂志名称：中华整形外科杂志
- 主管单位：中华整形烧伤外科杂志
- 主办单位：中国科学技术协会
- 国际刊号：11-4453/R
- 国内刊号：11-4453/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 文摘与引文数据库, 万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中)
腺病毒介导BMP2和BMP7基因共转染骨髓间充质干细胞表达人BMP2/7异源二聚体
高涛；唐胜建；牛常英；苗春雷；张伟；周陆陆；吴彩风；刘方军
关键词：骨形态发生蛋白质类, 骨髓, 间质干细胞, 腺病毒, 基因转移技术
摘要：目的 通过腺病毒介导BMP2及BMP7基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中共表达,探讨大鼠BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性,以及能否有效表达重组人源BMP2/7异源二聚体蛋白.方法 3只10周龄雄性Fischer大鼠,取其骨髓组织分离纯化BMSCs,并以贴壁法体外传代培养.同时构建并包装制备携带BMP2或BMP7靶基因的高滴度重组腺病毒备用.取体外培养的第3代BMSCs,按10 000个/cm2的细胞密度接种于6孔培养板,细胞贴壁培养过夜.实验组细胞加入无血清培养液稀释的携带BMP2和BMP7靶基因的腺病毒液各100μl(病毒感染复数分别为100 MOI),而对照组细胞加入感染复数亦为200 MOI的携带GFP基因的阴性对照腺病毒液.细胞培养第7天后,收集该条件细胞培养上清,经抗人BMP7抗体交联的G蛋白亲合层析柱滤过,以获取抗体特异性免疫蛋白沉淀,用于Western Blot及ELISA检测BMP2/7异源二聚体的有效体外表达.结果 成功构建携带有BMP2或BMP7目的基因的质粒载体并经HEK293T细胞包装成复制缺陷型重组腺病毒,Western Blot检测观察到BMP2在55 000大小处呈现有阳性目的条带,而目的基因BMP7则表现在49 000大小处有阳性条带;以阴性对照腺病毒Ad-GFP感染大鼠BMSCs 48 h,镜下见BMSCs贴壁良好,未见细胞毒性现象;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的显著表达;腺病毒载体介导BMP2和BMP7基因共转染大鼠BMSCs 48 h后,以Western-Blot检测细胞上清液,于47 000大小处检测到表达阳性的BMP2/7异源二聚体目的条带.ELISA定量则显示重组BMP2/7异源二聚体蛋白表达量为(4.33±0.42) ng/ml,对照组为(0.08±0.02) ng/ml,经配对样本t检验,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠BMSCs是腺病毒介导基因转染的有效靶细胞,腺病毒携带BMP2和BMP7靶基因在BMSCs中实现了有效共表达,且获得了较高表达水平的人源重组BMP2/7异源二聚体蛋白,为下一步研究真核细胞表达BMP2/7异源二聚体蛋白诱导大鼠骨髓间充质干细胞的体、内外成骨实验奠定了基础.
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